JOH:替诺福韦基因型耐药和表型耐药首次获证,四位点突变跨越耐药屏障

2019-03-14 编辑: 来源:国际肝病网
富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)是强效低耐药的药物,临床应用十年尚未检测到针对性的基因型耐药及相关表型耐药。但从理论上说,由于病毒的持续存在和HBV基因组的异质性,出现病毒耐药突变是不可避免的。Journal of Hepatology杂志近日发表了韩国学者的一项研究,可能是首个有关TDF临床耐药和体外实验耐药的HBV突变报道。

一直认为,TDF为高耐药屏障药物。体外实验中,rtA194T突变可增加IC50,但在体内,该突变并不能引起替诺福韦耐药或部分耐药。还有其他一些相关报道,但均未见导致替诺福韦敏感性下降10倍以上的基因突变。然而,在接受TDF治疗的患者中,的确有少数患者尽管依从性良好但仍然应答不充分,并且部分患者出现了病毒学突破。因此研究者认为,上述患者体内可能存在针对替诺福韦的基因型耐药。

此次发表的这项研究前瞻性地纳入了2例在使用含TDF方案治疗期间出现病毒学突破的患者,对其HBV的逆转录酶(RT)基因进行测序。随后研究者通过定点突变构建了11个携带RT基因系列突变的HBV克隆,通过Southern印迹分析和实时PCR确定各个克隆对TDF的敏感性,并通过超深度测序和克隆分析评价突变株的相对频率。

这两例患者中,一例先后接受过拉米夫定单药→拉米夫定+阿德福韦→拉米夫定+TDF→恩替卡韦+TDF治疗,每次更换治疗方案均因出现了病毒学突破,并先后检出了rtL180I、rtM204I和rtA181T突变。

另一例患者则先后接受了拉米夫定单药→恩替卡韦单药→阿德福韦+拉米夫定→TDF+替比夫定→TDF单药治疗,这名患者主要在当地私人诊所就诊,期间有过脱落,缺少过去的耐药检测数据。

两例患者的依从性通过每次复诊时的问诊、药品持有率(MPR)和血清TDF和恩替卡韦的谷浓度检测得到确认。从这2例患者体内分离得到的病毒株中,有5种突变普遍存在,包括rtS106C[C]、rtH126Y[Y]、rtD134E[E]、rtM204I/V和rtL269I[I]。突变C、Y和E是与耐药相关的新突变。

在药敏试验中,野生型HBV的IC50为3.8±0.6 μmol/L,而CYE和CYEI突变病毒的IC50分别为14.1±1.8 molL和58.1±0.9 μmol/L。野生型HBV的IC90为30±0.5 μmol/L,而CYE和CYEI突变病毒的IC90分别为185±0.5 molL和790±0.2 molL。也就是说,如果病毒出现四个位点的联合突变(CYEI),则抑制50%和90%的病毒所需的替诺福韦量分别要增加15.3倍和26.3倍。

超深度测序和/或克隆分析显示,CYEI突变在这两例患者中为优势株,验证了结果的临床意义。

另外,进一步分析显示,所有对TDF耐药的突变株对衣壳组装调节剂NVR3-778的敏感性野生型病毒相似,IC50分别为<0.4 μmol/L和0.4 μmol/L。

这说明,对替诺福韦耐药的病毒是可以出现的,只是这个耐药屏障很高,需要同时出现四个位点的突变。CYE三个位点突变降低替诺福韦的敏感性,而CYEI四个位点突变则可引起替诺福韦完全耐药。研究者认为,当前对于TDF耐药的乙型肝炎患者,并无有效的挽救治疗方案,TAF是否有效尚未得到验证。因此对多重耐药患者的治疗需格外谨慎。这也再次强调了新型药物开发的意义。



原文链接:Park ES, Lee AR, Kim DH, et al. Identification of a quadruple mutation that confers tenofovir resistance in chronic hepatitis B patients. J Hepatol. 2019 Feb 20, 在线发表. https://doi.org/10.1016/j.jhep.2019.02.006




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