EGFR基因突变检测(ARMS法)

2018-02-07 编辑:admin
项目介绍
Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR)是上皮生长因子(EGF)细胞增殖和信号传导的受体。EGFR属于ErbB受体家族的一种,该家族包括EGFR (ErbB-1), HER2/c-neu(ErbB-2), Her 3(ErbB-3) 和 Her 4(ErbB-4)。EGFR也被称作HER1、ErbB1,研究表明在许多实体肿瘤中存在EGFR的突变或者异常表达。EGFR与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。其可能机制有:EGFR的高表达引起下游信号传导的增强;突变型EGFR受体或配体表达的增加导致EGFR的持续活化;自分泌环的作用增强;受体下调机制的破坏;异常信号传导通路的激活等。EGFR的过表达在恶性肿瘤的演进中起重要作用,胶质细胞、肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等组织中都有EGFR的过表达。对胶质细胞瘤的研究发现EGFR的高表达主要与其基因扩增有关。但有时EGFR表达水平的调节异常也存在于翻译及翻译后。EGFR在肿瘤中的高表达还可能与活化后降解减少有关。

目前,针对EGFR开发的分子靶向药物主要分为两类:1)小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKIs),如吉非替尼(Gefitinib,也成为易瑞沙/Iressa)和厄洛替尼(Erlotinib,也成为特罗凯/Tarceva),可以抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活性;2)单克隆抗体(mAb),如西妥昔单抗(Cetuximab,也成为爱必妥/Erbitux)和帕尼单抗(Panitumumab,也称为维克替比/Vectibix),可以与EGFR胞外区结合,阻断依赖于配体的EGFR活化。上述药物通过不同途径阻断EGFR介导的细胞内信号转导通路,从而抑制肿瘤生长、转移和血管生成,并促进肿瘤细胞凋亡,提高放化疗敏感性。

吉非替尼和厄罗替尼都属于EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI),靶向结合EGFR细胞内结构域的ATP结合位点,抑制过表达、或异常激活的人EGFR酪氨酸激酶活性。这些靶向药物已很好地应用于NSCLC患者的临床治疗,但对于EGFR基因没有突变的患者则效果甚微。

EGFR基因突变,尤其是位于外显子19的缺失和外显子21的替代突变,与肿瘤对酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)的敏感性密切相关。肺癌细胞中有EGFR酪氨酸激酶基因编码区外显子19缺失或外显子18、21突变的患者,靶向药物易瑞沙的有效率高达80%以上。NSCLC患者肿瘤组织中携带EGFR基因突变者在亚裔人群中比例较高,中国NSCLC患者总突变率为30%-40%,高于高加索人种(10%-15%)。

另外,大部分对EGFR-TKI治疗有效的患者最终都会对EGFR-TKI产生耐药性。进一步临床研究表明,EGFR基因外显子20的体细胞突变是EGFR-TKI继发耐药的主要机制之一。外显子20的突变类型主要是第790位密码子出现C>;T转换,引起EGFR蛋白中该位点的氨基酸由苏氨酸转变为甲硫氨酸(T790M)。这一突变仅见于药物治疗后复发者,突变使得非小细胞肺癌患者对吉非替尼和厄罗替尼出现继发耐药。

2010版的美国国家癌症综合网络(NCCN)癌症治疗指南中明确指出:EGFR突变,尤其是外显子19的缺失突变和外显子21的L858R突变,与肿瘤对TKIs如吉非替尼治疗敏感性有重要关系。因此EGFR的基因突变检测对于指导这些患者选择能否选用TKIs治疗具有重要意义。
样本要求
石蜡切片、蜡块、新鲜组织、外周血、胸腹水

送检要求:

1、石蜡切片: 常温运输; A.大标本,10张(3-5μm); B.穿刺标本8张(3-5μm),每张3个切面;

2、蜡块:常温运输;

3、新鲜组织:保存于95%酒精,4℃运输 ;

4、外周血:5-10mlEDTA抗凝血l1000g离心20分钟取上清,4℃运输;

5、胸腹水:50-200ml1000g离心20分钟,收集沉积细胞后,加入95%酒精,4℃运输。
参考值
ARMS-QPCR法
临床意义
EGFR酪氨酸激酶抑制剂以易瑞沙和特罗凯等为代表在NSCLC中,特别是在肺腺癌的治疗中显示出较好的抗肿瘤疗效,而研究表明EGFR基因某些突变和NSCLC患者对EGFR-TKIs药物敏感性密切相关,对其突变位点的检测可作为评估预期获益程度的一个重要指标。

EGFR第18外显子发生突变频率比较低约为4%,主要为点突变G719C,发生EGFR第18外显子突变的患者使用吉非替尼或厄洛替尼敏感性高。

EGFR第19外显子是EGFR突变热点,突变种类多样,主要为缺失突变和部分点突变,发生EGFR第19外显子突变的患者使用吉非替尼或厄洛替尼敏感性高。

EGFR20外显子突变:非小细胞肺癌患者EGFR20外显子发生S761I突变对吉非替尼或厄洛替尼治疗敏感,但疗效不如19和21外显子突变。

EGFR21外显子突变:非小细胞肺癌患者EGFR21外显子发生L858R或者L861突变对吉非替尼或厄洛替尼治疗敏感。

研究发现大部分对EGFR-TKI治疗有效的患者最终都会对EGFR-TKI产生耐药性。进一步临床研究表明,EGFR基因外显子20的体细胞突变是EGFR-TKI继发耐药的主要机制之一。外显子20的突变类型主要是第790位密码子出现C>T转换,引起EGFR蛋白中该位点的氨基酸由苏氨酸转变为甲硫氨酸(T790M),突变使得非小细胞肺癌患者对吉非替尼和厄罗替尼出现继发耐药。
注意事项
NSCLC患者肿瘤组织中携带EGFR基因突变者在亚裔人群中比例较高,中国NSCLC患者总突变率为30%-40%,高于高加索人种(10%-15%)。

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