AASLD2020:HBV感染治疗新工具-通过Gapmers沉默乙肝病毒基因

2020-11-27 编辑: 来源:医诺医学 作者:略晓薛
由于技术发展所限,现有技术手段还没办法彻底根除细胞内的乙肝病毒 cccDNA ,cccDNA 在细胞内的持续存在给乙肝病毒蛋白的持续表达提供了源泉。值得注意的是,目前的研究已经发现有一小部分已经成功治疗的慢乙肝患者后续仍发展为肝癌,这就提示目前的治疗策略仍有一定的局限性,需要开发新的治疗策略以解决问题。

HBV X基因(HBX)由于其共末端定位,可能成为基因治疗策略的最佳靶标。

在2020年的美国肝病学会年会上,来自巴塞罗那瓦勒德希伯伦大学医院(Vall D’hebron University Hospital)等研究机构的研究人员介绍了一种靶向HBX超保守区的反义锁核酸(LNA)Gapmer(GP)病毒基因沉默新系统。

首先,研究人员将HepG2-NTCP细胞用2.5% DMSO 处理至少14天,然后通过在37oC环境下以500个基因组当量的HBV进行感染旋转接种(spinoculation)1h,并孵育过夜。在感染后第48h或第5天,使用TransIT-X2(Mirus)用 Gapmer(GP)(50nM 的 GP1和/或GP4,Qiagen)和/或siRNA(50nM)处理感染的细胞。

处理72小时后收集细胞和上清液。通过RNA easy Plus微型试剂盒(Qiagen)从细胞中提取前基因组RNA(pgRNA),并使用TaqMan探针(Roche,Lightcycler?480)通过 RT-qPCR 进行定量。通过化学发光酶法(Roche,COBAS?8000)对上清液中的HBsAg和HBeAg进行定量。

研究结果显示,未经处理的模拟感染细胞可以有效表达HBV, pgRNA 的峰值可达 4 log( copies / ng),HBsAg 的峰值可达2U / mL , HBeAg 的峰值可达 16 IU / mL。

Gapmer(GP) 的早期治疗(在感染后48h时)有效抑制了 HBV pgRNA 水平的攀升,GP1,GP4和 GP1 + GP4 的平均抑制为分别达到 75.2±4.5 %、54.1±19.2 % 和 54.3±15.5%。

研究同时还观察到了对病毒蛋白表达相似的百分比抑制作用( GP1,GP4,GP1 + GP4 分别为:HBeAg = 79.3±8.3%,60.2±13.8%,70.4±11.6%; HBsAg = 71.1±10.2%,60.8±15.3%; 64.8±8.7%)。

当在感染后第5天开始处理时,抑制作用仍得以维持,GP1的抑制百分比为81%,GP4的抑制百分比为78%,siRNA的抑制百分比为69%。值得注意的是,GP4 和 siRNA 联合处理可将抑制作用部分提高至93.3%。

综上数据,研究认为靶向HBX基因超保守区的Gapmers在早期或晚期治疗中均能有效抑制体外的HBV表达。Gapmers 与针对相同区域的 siRNA 联合处理在细胞核和细胞质水平中抑制HBV表达可能是一种有价值的策略。(更多肝病新药研究信息敬请关注“肝脏时间”微信公众号)!

信息源:GENE SILENCING BY GAPMERS: A NEW THERAPEUTIC TOOL IN HBV INFECTION

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